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Chromatographie par échange d'ions acides aminés


chromatographie par échange d'ions acides aminés

Résines échangeuses de cations forts sont généralement des groupes fonctionnels acide sulfonique tandis que résines échangeuse de cations faibles ont des acides carboxyliques.
Certaines protéines sont facturés plus positivement tandis que dautres portent une charge plus négative.
Lorsque le pH est inférieur au pHi (pH pHi l'acide aminé est chargé positivement (forme cationique).Echangeurs d'anions (phase stationnaire chargée positivement) : - Ammonium quaternaire (Q) - échangeur d'anions fort - Diéthylaminoéthyle (deae) - échangeur d'anions faible.Lhémoglobine, une protéine de couleur brunâtre, se trouvait dans les fractions non liées, tandis que le cytochrome C, une protéine de couleur rougeâtre, a été observé dans la fraction liée.Quatre groupes fonctionnels chargés sont plus couramment utilisés dans la chromatographie d'échange d'ions.Pour les protéines, pH est sélectionnée selon son point isoélectrique,.Les protéines ont plusieurs acides aminés avec groupes fonctionnels qui sont facturés.Exécuter un échantillon de protéine à travers une colonne échangeuse de cations.Le point isoélectrique (pI) d'une protéine est le pH auquel la protéine a une charge globale nette égale à zéro.Deux types de chromatographie d'échange d'ions sont à distinguer:, chromatographie d'échange d'anions (phase stationnaire chargée positivement qui se lie à des protéines chargées négativement)., chromatographie d'échange de cations (phase stationnaire chargée négativement escort bercy qui se lie à des protéines chargées positivement).Chromatographie d'échange d'ions (ion exchange chromatography, ).Les tampons utilisés, collectivement appelés la phase mobile, sont également importants à une séparation, notamment en termes.Chromatographie échangeuse danions peut être utilisée pour mesurer la concentration des anions, y compris des sulfates, de nitrates, de nitrites, de fluorure et de chlorure.Exercices - Chromatographie, Electrophorèse.Il existe de nombreuses formes de chromatographie en phase liquide, chacun avec des capacités différentes pour séparer les composants dun mélange.
Hplc est similaire à la chromatographie sur colonne fait preuve dans cette vidéo, sauf que cest automatisé et fonctionnant à des pressions très élevées.




Laisser le tampon sécouler dehors par gravité dans un tube ci-dessous.Elution avec les sels: En général, les sels tels que NaCl ou KCl sont utilisés pour l'élution.Vous avez juste regardé introduction de JoVE pour chromatographie échangeuse dions.Tout dabord, une colonne à garnissage contenant une résine échangeuse danions ou -cation est équilibrée à laide de la mémoire tampon.Glu est élué en premier (pHi 3,22) puis Leu l'est ensuite (pHi 5,98).De même, la distribution des acides aminés les uns par rapport aux autres peut affecter le pI d'une protéine (ceci n'est pas pris en considération lors des calculs théoriques de pI).Il peut également servir à récupérer luranium et retirez-la de leau ou dautres échantillons environnementaux.Pour les 2 derniers lavages, centrifuger la colonne pendant 10 s pour sassurer que toutes les espèces non liés lavent la colonne.Il y a deux types principaux de cette technique.Dans cet exemple, chromatographie sur colonne a été utilisée pour séparer un mélange dADN bicaténaire simple et double.Une résine polystyrénique substituée par des groupements sulfonate (-SO3-) est chargée négativement et est donc une résine échangeuse de cations.
Dans cet exemple, lhémoglobine et le cytochrome C, ont été séparés.




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